常規(guī)PCR法快速鑒別不同種屬來(lái)源的粗品肝素鈉
發(fā)布時(shí)間：2015-09-07
【作者】 陳川； 朱思宇； 李麗； 胡淑媛； 羅都強(qiáng)；
中國(guó)生物制品學(xué)雜志 , Chinese Journal of Biologicals,
2014年05期
【機(jī)構(gòu)】 河北大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院； 河北大學(xué)藥物化學(xué)與分子診斷省部共建教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室；
【摘要】 目的采用常規(guī)PCR法快速鑒別不同種屬來(lái)源的粗品肝素鈉。方法通過(guò)柱回收和膠回收兩步回收法,從粗品肝素鈉中提取動(dòng)物殘留核酸,以其為模板,通過(guò)常規(guī)PCR法進(jìn)行種屬來(lái)源的鑒定。分別以豬、羊來(lái)源的核酸為模板,用3種種屬特異性引物(豬、羊1、羊2)進(jìn)行PCR擴(kuò)增,驗(yàn)證引物的特異性;對(duì)柱回收、膠回收和兩步回收法提取的核酸樣品及含不同比例(1%、5%、10%、15%)羊來(lái)源肝素鈉的混合樣品進(jìn)行PCR檢測(cè);并檢測(cè)3批次肝素鈉樣品的種屬來(lái)源。結(jié)果豬的引物能特異性擴(kuò)增豬來(lái)源的核酸,羊的引物能特異性擴(kuò)增羊來(lái)源的核酸;采用單一膠回收和柱回收法提取的殘留核酸,不能有效地利用常規(guī)PCR鑒定種屬來(lái)源,而兩步回收法提取的殘留核酸,能有效地利用常規(guī)PCR鑒定種屬來(lái)源;采用兩步回收法提取核酸,可檢測(cè)到含1%羊來(lái)源肝素鈉的混合樣品;3批次的肝素鈉樣品中均混有羊肝素鈉。結(jié)論常規(guī)PCR法操作簡(jiǎn)便迅速,成本較低,可用于不同種屬來(lái)源的粗品肝素鈉的定性檢測(cè)。